免疫分析常用酶
酶聯(lián)免疫分析酶技術(shù)具有高敏感性的關(guān)鍵是選用有生物放大作用的酶作為標(biāo)記物。酶免疫分析中使用的酶要求符合下列一些條件：1酶的純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化速率高、酶作用的專一性強； 2酶蛋白分子具有足夠的偶聯(lián)用標(biāo)記基團，用各種化學(xué)方法與抗原、抗體蛋白分子偶聯(lián)處理后，仍保持較高的催化活性；3使用穩(wěn)定性和保存穩(wěn)定性好；4測定酶活性的方法要求簡便、靈敏、快速；5待測體液中不應(yīng)存在與標(biāo)記酶相同的酶，以防干擾任用；6待測溶液中應(yīng)無底物、反應(yīng)抑制劑和其他干擾因素存在；7酶的來源、純化和供應(yīng)較方便，8均相酶免疫測定法中使用的酶，還要求當(dāng)抗體與半抗原－酶結(jié)合物結(jié)合后，酶的活性表現(xiàn)出抑制或激活。
在實驗中目前常用的示蹤酶有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶以及葡萄糖氧化酶、β－D－半乳糖苷酶等。其中，根據(jù)分子量的大小及酶反應(yīng)性的特點，在固相或非固相酶標(biāo)免疫測定時應(yīng)加以選擇。
在酶聯(lián)免疫分析技術(shù)中，由于酶標(biāo)復(fù)合物常通過細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi)與靶分子結(jié)合，因此所用的標(biāo)記應(yīng)選擇分子量低而酶活性高的酶類。在標(biāo)記酶的質(zhì)量評價中，通常需要兩個指標(biāo)：一個是RZ比值，另一個是活性單位。RZ表示酶的純度，即酶蛋白中活性部分與非活性部分大吸光度的比值。通常根據(jù)酶的物理化學(xué)性質(zhì)來確定它是否適合作標(biāo)記物。與各向異性標(biāo)記物相比，酶有多種測定方法，而且通過二級放大還可測定分子量很小的酶，這說明酶是一類通用的標(biāo)記物，可以在各種分析中廣泛應(yīng)用，從簡易的操作到高靈敏的自動化程序，因此，酶是一種優(yōu)良標(biāo)記物，但酶比熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物更易受到環(huán)境因素的影響而失活。此外酶免疫分析法在低檢測限或檢測范圍方面的局限性有待進一步改進，但是這種局限性可以通過選擇終點測定法來消除。
