聚合酶鏈式反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附分析法(PCR-ELISA)
聚合鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,簡稱PCR),是用于放大特定的DNA片段,在生物體外復(fù)制DNA的分子生物學(xué)技術(shù).ELISA是免疫學(xué)測定中敏感和特異的檢測方法的代表.PCR-ELISA綜合上述兩方法,成為繼PCR之后靈敏性更高,特異性更強,更省時易行的新檢測方法,并且解決了PCR產(chǎn)物宣的問題,使得PCR在臨床醫(yī)學(xué)上得以應(yīng)用.
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)增加的.PCR能將pg=10-⒓g量級的DNA起始待測模板擴增到微克(ug=10-⒍g)水平,能從100萬個細胞中檢測出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個空斑形成單位(Plaque form-ing unit,簡稱PFU);在細菌的檢測中,即使低至1個細菌的靶DNA也能被檢出.PCR是分子生物學(xué)中檢測DNA普遍和靈敏的技術(shù).PCR反應(yīng)擴增出相關(guān)DNA高拷貝數(shù),以前用熒光素(溴化乙錠,簡稱EB)染色凝膠電泳進行檢測,但無法定量.曾有人利用熒光素染色凝膠電泳的掃描照片進行光密度分析,希望通過光密度的變化實現(xiàn)PCR的定量,但由于熒光素染色凝膠電泳本身的檢測結(jié)果不具有特異性,因此光密度分析無法獲得定量的結(jié)果,這使得長期以為,PCR只能獲得相對定量的結(jié)果,無法應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)上.科技的發(fā)展是相互影響的,酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)的出現(xiàn)啟發(fā)了人們,為PCR的定量開辟了一條新的思路.在PCR擴增以后,利用ELISA的原理和方法,使用酶標抗體,通過免疫吸附,酶促反應(yīng)產(chǎn)物的分析來實現(xiàn)定量,這樣的新方法被稱為PCR-ELISA.
